染色凋亡試劑盒（Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit）是一種采用Hoechst33342和碘化丙啶（Propidium lodide，PI）雙熒光染色方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞壞死分析的檢測試劑盒。單純的PI染色能夠觀察DNA直方圖上凋亡細(xì)胞的亞G1峰，但只能代表G0/G1期發(fā)生凋亡，無法觀察S期和G2期發(fā)生的細(xì)胞凋亡。而且，細(xì)胞經(jīng)過固定后無法對活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分?？梢源┩讣?xì)胞膜，進(jìn)入正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞，與DNA結(jié)合，能在紫外線下顯示藍(lán)色熒光，而且染色后凋亡細(xì)胞熒光會(huì)比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。

　　細(xì)胞凋亡是生物界重要的生命現(xiàn)象之一。從線蟲至高等的哺乳類動(dòng)物，從胚胎至成人，從生理到病理，從生到死的整個(gè)過程，體內(nèi)不同的細(xì)胞多具有這類死亡方式。自100多年前Carl Vogt 發(fā)現(xiàn)這種死亡方式到1972年Kerr等人研究并命名這種死亡為凋亡（apoptosis），其后大量有關(guān)凋亡的研究不斷深入，人們對此也不斷產(chǎn)生新的認(rèn)識(shí)：凋亡是由基因編程調(diào)控的細(xì)胞自主過程，也是機(jī)體維持自身穩(wěn)定的一種基本生理機(jī)制，是有許多基因產(chǎn)物及細(xì)胞因子參與的一種有序的細(xì)胞自我消亡形式。調(diào)亡過程一般可分為三個(gè)階段：誘導(dǎo)期、效應(yīng)期和降解期。

　　染色凋亡試劑盒貼壁細(xì)胞處理方法：

　　1、取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時(shí)間，無菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用無菌的PBS 或生理鹽水洗滌3次，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌1次。

　　2、加入干預(yù)條件使細(xì)胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入Hoechst 固定液0.5ml。

　　3、去除固定液，用PBS或生理鹽水洗，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。

　　4、加入Hoechst 33258染色液0.5ml孵育。也宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

　　5、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)。

　　6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，讓細(xì)胞接觸封片劑，盡量避免氣泡。

　　7、熒光顯微鏡可檢測到呈藍(lán)色的細(xì)胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。